Universidad de Chile
Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias
Departamento de Producción Animal
Curso de Apicultura

ASCOSPHAEROSIS
O CRÍA DE TIZA

Profesor:	Dr. José Peldoza

Por:       Javiera Solís Larenas
Esteban Gardilcic Molina
ÍNDICE

1	-------------------------------------     Introducción

2	-------------------------------------     Distribución

3	-------------------------------------     Ciclo de Acosphaera apis

5	-------------------------------------     Forma de contagio de la                            Ascosphaerosis

6	-------------------------------------     Diagnóstico de la Ascosphaerosis

7	-------------------------------------     Control

11	-------------------------------------     Tratamiento

12	-------------------------------------     Conclusión

13	-------------------------------------     Imágenes de apoyo

15	-------------------------------------     Bibliografía

INTRODUCCION

La apicultura es una actividad que desarrolla el ser humano desde tiempos remotos con el objetivo de obtener todos aquellos productos fabricados de una u otra manera por las abejas, o cualquier beneficio que ellas le puedan aportar. Los métodos son muy variados a lo largo de las diferentes culturas que existen en el mundo, pero en definitiva los problemas sanitarios que afectan nuestras colmenas son los mismos actualmente, debido a la rapidez con que las enfermedades se han propagado. Una enfermedad que se presente en una colmena, dependiendo cual sea y de su intensidad, puede desde solo afectar la eficiencia en la producción de la colmena, a devastarla por completo. Sea cual sea el efecto en definitiva, el apicultor de todas maneras se ver afectado, ya que la producción de una colmena está en directa proporción con el estado sanitario de esta.
Una de estas enfermedades es la Ascophaerosis, la cual es capaz de debilitar la colmena al punto de devastar su producción si no es controlada a tiempo.
La Ascophaerosis es una micosis invasiva que afecta exclusivamente a las larvas. Es conocida también como Cría yesificada, Pollo Escayolado, Cría Calcificada o Chalkbrood. Corresponde a una patología causada por un hongo actualmente conocido como Ascosphaera apis, y que era originalmente conocido como Pericystis apis, que tiene la capacidad de infectar muchas especies de insectos en estadios larvarios. Aún no se sabe si el hongo es una variedad que es capaz de atacar a muchas especies diferentes de insectos o son variantes específicas de este para cada una de ellas. Es la micosis mas frecuente en la abeja productora de miel.
Esta enfermedad fue detectada en el inicio del siglo XX en Europa, donde fue conocida con el nombre de Chalkbrood. La larva de abeja muerta es momificada y reemplazada por el micelio del hongo, lo que le da el color grisáceo (chalky color) que originó el nombre Chalkbrood para esta patología.

DISTRIBUCIÓN

La cría yesificada se encuentra muy diseminada en Europa, América del norte, Asia y en algunos países de América del sur, América central, África y Oceanía. En el caso de Argentina, el proceso de aparición y expansión de la Ascosferosis comenzó en diferentes apiarios de la provincia de Buenos Aires y fue considerada un problema menor hasta 1988, aproximadamente, momento en el cual la enfermedad se comienza a diseminar a lo largo del país llegando a niveles de infección muy importantes. Es de este modo como ocurrió en la mayoría de los países actualmente afectados, considerando la enfermedad inicialmente como un problema menor que luego se salió de control.

CICLO DE ASCOSPHAERA APIS

El ciclo de vida de este organismo no está bien definido en la naturaleza. La Ascosphaera apis existe como un micelio blanco y de gran tamaño que tiene hifas aéreas, superficiales y profundas (Fig. 1). Las hifas de superficie miden entre 4 y 8 micrones con un núcleo muy pequeño. Su reproducción es de tipo sexual, pero en cultivo no se evidencian diferencias macro entre ambos sexos. Cuando las hifas de dos individuos compatibles se acercan lo suficiente, las hifas de la hembra produce grandes protuberancias que se elongan y crecen hacia las hifas del macho haciendo contacto (todo este proceso demora de 15 a 20 minutos). Esto continua con una serie de divisiones celulares que culminan con la formación de ascosporas contenidas en bolas de esporas que, a su vez son almacenadas juntas formando una gran estructura de color oscuro debido a que las paredes de las esporas son del mismo color.
Estas esporas requieren de un ambiente muy cercano a la anaerobiosis y una temperatura de 35 C. para germinar, pero para crecer requieren de un ambiente aeróbico y de una temperatura de 30 C. Estas son condiciones muy específicas que determinan que el momento de vulnerabilidad de la larva sea muy puntual. 
La infección de la larva ocurre en el momento en que las esporas de Ascosphaera apis son ingeridas por esta junto con la comida. La espora germina en la parte posterior de intestino medio, y el micelio formado comienza a crecer invadiendo los tejidos de la larva, destruyéndola, ya que atraviesa su superficie emergiendo a través de esta y finalmente recubre casi todo el exterior de su cuerpo.
Si bien las larvas pueden ingerir esporas durante todo su período de alimentación, no siempre cursa con la enfermedad. Esto se debe a que, como el micelio no puede crecer en un medio anaeróbico, este es eliminado si las condiciones no son favorables para su crecimiento. Durante el primer período de cría tapada, se abre el ano como parte de su desarrollo natural, estableciéndose un medio aeróbico en el intestino, lo que favorece el crecimiento del hongo ya germinado y la posterior aparición de la sintomatología de la enfermedad que finalmente conlleva la muerte del individuo.
La ser retirada la larva muerta que se encuentra rodeada por el hongo y sus esporas, las esporas de este se depositan en el cuerpo de las obreras que lo toquen o son elevadas por brisas suaves de aire que circulan dentro de la colmena y esparcidas por todo el panal.
Las mismas pecoreadoras o los zánganos que llevan la espora en sus cuerpos salen al medio, dejándolas en las flores, el agua y en otras colmenas en caso de que entren a ellas propagando la enfermedad.
Hay estudios para evaluar efectividad de antimicóticos para el tratamiento de la cría de tiza que han demostrado que la enfermedad no se expresa de manera uniforme en el tiempo. Se aprecia una disminución del número de momias encontradas por colmena dos semanas después de cada inoculación controlada de esporas, que luego comienza a aumentar nuevamente. Esto evidencia que la enfermedad presenta un ciclo normal de aumento y disminución de la mortalidad dentro de la colmena.

FORMA DE CONTAGIO DE LA ASCOPHAEROSIS

Las esporas pueden ser ingresadas a la colmena por las pecoreadoras junto con el néctar, el polen o el agua que recolectan del medio, y las pasan a las larvas al alimentarlas y entre obreras por trofalaxia. También ocurre por el ingreso de abejas que transportan en partes de su cuerpo las esporas desde el medio o desde otra colmena, y es por esto que el enjambre, el pillaje y la deriva son factores que favorecen la propagación de la enfermedad dentro de un apiario o entre apiarios, también parásitos como Varroa son importantes vectores. Una vez dentro de la colmena se propagan por las mismas obreras que manipulan las larvas muertas para retirarlas, a las que se les pegan en su cuerpo las esporas, o en la misma maniobra de retirar las larvas afectadas, desde estas las esporas son liberadas al medio por las corrientes suaves de aire y se dispersan por la colmena llegando al polen y néctar almacenado, a otras obreras, a la madera de los marcos y cajas, y a la misma cera del panal (Fig.2). De este modo las larvas sanas pueden ser infectadas al ser alimentadas. Hay evidencias que afirman que las reinas también son capaces de diseminar la enfermedad al llegar a colmenas libres de esta, por lo que es fundamental para la prevención tanto para esta como para otras enfermedades, que en el momento de cambiar una reina, esta sea de un origen conocido y seguro.
Como cualquier enfermedad que afecte a las larvas, esta micosis es capaz de afectar directamente a fortaleza de una colmena, llegando a causar una mortalidad importante en las larvas por lo que el número de las obreras de esa generación será mucho menor, lo que implica un desequilibrio de la colmena y por consiguiente un mayor gasto en la mantención de sus condiciones internas.

DIAGNÓSTICO DE LA ASCOPHAEROSIS

El diagnóstico de la Cría de Tiza esta basado en la identificación de signos característicos de la enfermedad y en la identificación del agente causal en las momias.
La evidencia clínica se caracteriza por la siguiente sintomatología:
•	Encontrar tanto en el piso de la colmena como en la piquera las momias (Fig. 2).
•	La larva cuando muere a causa de esta micosis, lo hace generalmente luego de haber sido operculada.
•	La patología es más común en larvas de obreras y zánganos que en las larvas de reina.
•	Pequeñas perforaciones en el opérculo de celdas que aparentemente son normales.
•	En un principio, cuando la larva muerta es recién desoperculada tiene un color blanquecino y generalmente toma la forma de la celdilla (hexagonal). Con el paso del tiempo comienza a tomar un color grisáceo y toma una consistencia más dura, por lo que se les denomina “momias”. El color grisáceo o incluso negro lo adquiere solo cuando la larva haya sido infectada con hongos compatibles como para reproducirse y generar esporas, de otro modo permanecerá de color blanquecino (Fig. 3).

El número de momias hallado no puede ser usado como indicativo de la intensidad de la enfermedad. Estudios sobre esto indican que del número total de momias ingresadas en forma controlada a colmenas sanas (con cuatro repeticiones del experimento), solo se recuperaron entre 60% y 96% de las momias ingresadas. Los porcentajes variaron, aparentemente, en relación a la conducta y capacidad de aseo de cada colmena. 
Por lo tanto la aparición de momias en el fondo de las colmenas o en el suelo, justo bajo la piquera, o en los cazapolen es solo indicativo de la presencia de la enfermedad y no de su intensidad. 
El diagnóstico de laboratorio se basa en encontrar al agente causal (A. Apis) en las muestras analizadas. La búsqueda del hongo en cuestión se realiza preferentemente en momias de color gris o negro, dado que el color es representativo de la presencia de esporas, las cuales son importantes en la identificación taxonómica del hongo. Parte de la muestra se le adiciona agua o alguna tinción y luego se agita. La suspensión resultante es analizada bajo el microscopio, en la cual se busca la presencia de esporas de Ascosphaera apis, que de aparecer son una prueba determinante del diagnóstico.
En el caso de solo tener momias de color blanco, el diagnóstico bajo el microscopio no es determinante, y lo que corresponde hacer en este caso es un cultivo del hongo en un agar adecuado (agar dextrosa).
Otro medio de diagnóstico para la detección e identificación de Ascosphaera apis es el llamado PCR y lo que hace es identificar al hongo mediante el análisis de su genoma.

CONTROL

Hay una serie de técnicas de manejo de las colmenas que minimizan los efectos de la Cría de tiza en las familias. Estas son:
•	Fortalecer colmenas muy debilitadas a causa de Ascophaerosis mediante la adición de abejas adultas jóvenes y marcos de cría, alimentándolas con candy y no permitiéndoles invernar en cámaras de cría de un tamaño muy grande en proporción al tamaño de la colmena lo que les causaría problemas para mantener un eficiente control de la temperatura (tendería a bajar la temperatura, lo que favorece la germinación de las esporas).
•	Recambio periódico de las reinas.
•	Mantener las colmenas bien ventiladas, lo que puede ser favorecido aumentando un poco de tamaño la piquera.
•	Remover frecuentemente las momias expulsadas fuera de la piquera de la colmena por las obreras.
•	Que las revisiones de la colmena sean lo más espaciadas posible, sobretodo en caso de que las temperaturas ambientales sean bajas, de modo de reducir el impacto sobre la colmena y tratar de que la temperatura no se vea afectada con demasiada frecuencia. Esto se hace porque una disminución en la temperatura de la colmena, aunque sean unos pocos grados, es predisponerte para esta micosis.
•	Para casos muy severos de infección dentro de un apiario, se recomienda la incineración de la colmena.
•	Las esporas presentes en la miel pueden ser destruidas por calor (baño maría), a 65ºC por 8 horas o a 70ºC por 2 horas. Esta es la miel que debe ser usada para fabricar el candy, dado que si se usa un candy con esporas, este puede infectar otras colmenas. Es de importancia sobretodo en el candy usado en la alimentación de las nuevas reinas durante el transporte.
•	La radiación gamma liberada por Cobalto 60 es eficiente en la destrucción de las esporas (puede ser utilizado en la destrucción de esporas en productos de exportación).

Ha habido un gran interés en generar abejas resistentes a diferentes enfermedades, entre ellas a la Cría de Tiza. Se ha reportado que en estudios realizados en Australia (1964) que la eficiencia del comportamiento de higiene de las abejas adultas para remover las larvas enfermas se encuentra asociado a dos comportamientos distintos, uno de destapar las celdas afectadas y otro de remover la larva. En 1993 Spivak y William mediante experimentación determinaron que el hecho de que la colmena tenga buenas técnicas de higiene o no las tenga son determinantes en el nivel de infección de ellas. En 1998 Spivak y Downey reportaron que las colonias resistentes a la Cría de tiza y al Loque americano y además que removían las pupas infectadas con Varroa, todas estas conductas genéticamente determinadas, se propagaban eficientemente. También se ha demostrado que en abejas de líneas no higiénicas se puede inducir comportamiento higiénico mediante estímulos lo suficientemente fuertes. Spivak y Reuter en 1998 compararon colmenas de líneas genéticamente seleccionadas para ser higiénicas con colmenas de líneas comerciales de Italia que no habían sido seleccionadas para tener el comportamiento en cuestión. El resultado fue que las colmenas genéticamente seleccionadas para tener una buena higiene eran capaces de sacar de la colmena las larvas enfermas y de controlar enfermedades tan graves como el Varroa, y que la producción final de miel fue significativamente mayor en estas abejas que en las abejas comerciales de Italia. 
La generación de abejas genéticamente resistentes a enfermedades es un eficiente control de las patologías que afectan a las colmenas. Es por esto que en el último tiempo el tema de generar y trabajar con abejas de líneas resistentes ha pasado a ser un punto importante en la apicultura mundial.

Una serie de microorganismos benéficos para la colmena se encuentran en su interior como parte de su flora normal, ubicándose en el alimento almacenado, en las celdillas e incluso sobre el cuerpo de abejas sanas. Algunos de estos microorganismos viven en el tracto digestivo de las abejas ayudándolas en la digestión, otras ayudan a fermentar los granos de polen y a formar el pan de abeja que alimenta a las crías y a las abejas jóvenes, otros actúan ayudando en la preservación del pan de abeja, y también existen microbios tales como ciertos Penicillium, Aspergillus y Bacillus que producen componentes que tienen la capacidad de inhibir el crecimiento del hongo y por ende la producción de esporas. Estos fungicidas bacterianos tales como el ácido glucónico pueden ser la clave de la protección de nuestras abejas ante Ascosphaera apis en el futuro. Es lógico pensar que un fungicida producido por un microorganismo especializado sea mucho más eficiente en la penetración de las defensas de la espora del hongo que cualquier producto sintético, y por ende, que la aparición, posterior al comienzo de la utilización de un fungicida de este origen, de generaciones del hongo que sean resistentes a este tipo de sustancias sea de una probabilidad casi nula. 
En un estudio reciente en Australia se informó que más del 50% de las bacterias aisladas de colmenas del mismo país tenían la capacidad de inhibir la Ascophaerosis, lo que sugiere que hay una selección de bacterias que sean capaces de competir en el intestino de la abeja con hongos tales como este. La conclusión de esta investigación llevada hasta el momento sugiere fuertemente que es factible poder utilizar esta bacteria de la abeja Australiana para obtener un control biológico de la Cría de tiza.
Hay que tener cuidado con el uso de antibióticos tales como la estreptomicina y la tetraciclina que son capaces de destruir parte de esta flora normal de la colmena, lo que podría derivar en un desbalance entre la población del hongo y de las bacterias, aumentando radicalmente las probabilidades de que la colmena sea afectada por esta micosis.

TRATAMIENTO

Un amplio rango de fármacos se ha probado experimentalmente para comprobar si efectivamente son capaces de controlar la Ascosphaera apis, pero ninguno hasta el momento ha probado tener esta capacidad de forma lo suficientemente convincente como para ser aceptado a nivel mundial. Es por esto que aún se está en la búsqueda se esta quimioterapia. Este fármaco debe ser inocuo para las abejas y no dejar residuos en sus productos, además de tener la capacidad de eliminar al agente. Es por esto que el estudio sobre los microorganismos propios de las colmenas es de gran interés científico, ya que de dar resultado, estaría cumpliendo con todas las características que el tratamiento debería tener.

CONCLUSIÓN

A pesar de las numerosas investigaciones con respecto al control de esta enfermedad y de los numerosos productos que han desarrollado con este fin, aún no hay ningún producto que cumpla con las exigencias necesarias como para que mundialmente sea reconocido y aceptado como tratamiento. Al parecer la combinatoria de un correcto manejo de las colmenas y el uso de abejas con características genéticas de resistencia a la enfermedad son la mejor estrategia actual para tener buenos resultados en el control de enfermedades y en cierto modo garantizan buena producción anual. Pero hay que tener claro que no hay control que por si solo de resultados favorables, deben ser todos en conjunto los que finalmente controlarán el problema. Está entonces claro que no basta con tener una excelente línea de abejas higiénicas si el manejo de ellas es inadecuado, ya que de esta manera los resultados serán igual de negativos.
Por otro lado el mismo hecho de que la enfermedad se encuentre tan ampliamente diseminada hace aún más improbable que se logre su erradicación. De este modo, si la enfermedad no puede ser erradicada, es de suma importancia que el fármaco que se desarrolle para su control no produzca residuos en la miel o en otros productos de consumo humano. 

IMÁGENES DE APOYO

Fig. 1                                                                      

En la imagen de la izquierda se encuentra una imagen de las hifas de Ascosphaera apis. 
En la imagen de la derecha se observa una imagen de las esporas de Ascosphaera apis.

Fig.2

Fig. 3

Aquí se observa en la salida de la piquera y en el suelo las momias.

Fig. 4

Se ven las larvas muertas en las celdillas desoperculadas. Las otras imágenes son de momias, entre las cuales se encuentra una seccionada por la mitad.

BIBLIOGRAFÍA

•	Sitio web:	www.beekeeping.com/vita/resdev/chalkbrood.htm
•	Sitio web:	www.inta.gov.ar/apinet/la/ar/sanidad/yesi.htm
•	Sitio web:	www.beesourse.com/pov/usda/abjoct1976.htm
•	Sitio web:	www.ars.usda.gov/is/AR/archive/aug98/bees0898.htm
•	Sitio web:	www.rirdc.gov.au/reports/HBE/01-150.pdf
•	Sitio web:	www.vidaapicola.com/tecnica/sanidad/ascosfer.html